紅龍果莖潰瘍病之病原菌特性及其防治

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論文名稱: 紅龍果莖潰瘍病之病原菌特性及其防治
研究生姓名: 葉士財
指導教授姓名: 謝慶昌
出版年: 2016
學校名稱: 國立中興大學
系所名稱: 園藝學系所
關鍵字: 紅龍果、莖潰瘍病、中藥煎汁液、防治、殺菌劑、分子鑑定、貯藏、pitaya、pitaya stem canker、herbs extract、control、Fungicide、molecular identification、storage
摘要: "紅龍果為臺灣的新興作物之一,經濟效益高,近年來紅龍果莖潰瘍病(由Neoscytalidium dimidiatum引起)在中部地區發生嚴重,5-8月為罹病高峰期,該病原可經由孢子侵入當年生嫩莖、花器及果實,造成腐爛,由於目前尚無抗病品種,發病時嚴重影響植株生育及產量。本研究自田間所分離形態學與Neoscytalidium屬相似之菌株經增幅ITS序列約可得605bp DNA條帶,將PCR產物委經解序,並將其結果上傳於NCBI基因庫中比對,結果指出,菌株與NCBI 資料庫中N. dimidiatum菌株 BWH-TS1 (Acess no :JX524168.1) 之相似度達99%;再經柯霍氏法則測試病原性,確認可造成紅龍果產生莖潰瘍病(Pitaya stem canker)。 自田間蒐集疑似感染N. dimidiatum病斑之植物,包括大花咸豐草(Bidens pilosa var. radiata)、咖啡(Coffea arabica L.)、文旦(Citrus grandis L.)、龍葵(Solanum americanum Miller)、木瓜(Carica papaya Linn.)、牽牛花(Ipomoea nil L.)、小葉桑(Morus australisPoir.)、山葡萄(Ampelopsis brevipedunculata Maxim.)、姬牽牛(Ipomoea obscura L.)、葡萄(巨峰)(Vitis vinifera L. var. Kyoho)及紫背草(Emilia sonchifolia L.)等10種植物,經分離並以無傷口及傷口接種測試病原性,確定可讓原植物及紅龍果果實產生過敏性反應,再依ITS序列鑑定為N. dimidiatum。另以TCDF8菌株測試可能寄主範圍,結果證實自田間分離後之菌株經傷口回接後具有感染植物,包括甘藷(Ipomoea batatas L.)、義大利葡萄(V. vnifera L.cv. Cabernet Sauvignon)、血桐(Macaranga tanarius L.)、文心蘭(Oncidium flexuosum Lodd.)、紫背草、紫蘇(Perilla frutescens var. crispa)、蝴蝶蘭(Phalaenopsis amabilis L.)、蒟蒻(Amorphophallus konjac)、扁蒲(Lagenaria siceraria Molina)、櫻花(Prunus serrulata)、紅肉李(Prunus salicina Lindl.)、葡萄(巨峰)、山苧麻(Boehmeria nivea L.)及櫻桃(Cerasus pseudocerasus)等14種植物可產生過敏性反應。與TCDF8菌株經溫室接種後,具感染的植物包括,甘藷、義大利葡萄、文心蘭、紫背草B、紫蘇、蝴蝶蘭及木瓜A等7種植物,確定經傷口回接至紅龍果果實產生過敏性反應。「探討中寮鄉罹病區附近所分離之植物莖潰瘍病菌與感染區紅龍果莖潰瘍病菌之差異性,將來自上列植物(包括10種寄主)所得菌株以RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)進行聚合酵素連鎖反應,結果指出來自大花咸豐草V22菌株之親緣較其他菌株遠,其次為來自文心蘭V5菌株,代表病原菌在不同植物間仍有差異」。 比較不同紅龍果品係間對TCDF8菌之差異,經接種紅龍果嫩莖,7天後,經傷口接種後紅肉紅龍果莖感染率為56%,而白肉紅龍果莖為46%,對照組嫩莖則皆無發病;而以無傷口方式接種結果指出,在第7天後,嫩莖感染率平均在88%,對照無發病。另接種黃龍莖的罹病度為92%,對照3%。紅龍果莖潰瘍病菌株生物特性測試結果,指出菌絲在11~40℃之間皆可生長,以15~40℃較佳,於35℃下第2天即長滿90mm培養皿,如果以連續在11~13℃溫度下培養12天,菌絲仍可緩慢生長。紅龍果莖潰瘍病菌發芽率測試結果,指出10℃與50℃紅龍果潰瘍病菌發芽率低,分別為3%與0.5%。20~40℃為發芽適溫,發芽率達92%以上,其中35℃發芽率最高達96.8%。另pH值測試結果,指出pH7最適本病原菌孢子及菌絲的生長,pH9可抑制本病菌菌絲之生長。測試植物保護手冊中登記許可在紅龍果炭疽病之藥劑對紅龍果莖潰瘍病菌之防治效果,其中以得克利、賽普護汰寧及免得爛等藥劑效果最好,可達百分之百抑制菌絲生長效果。其他未登記許可藥劑,可完全抑制病原菌絲生長的藥劑有平克座、撲克拉、邁克尼、滅特座、待普克利及普克利等單一劑型藥劑;而混合劑有得克芬胺、三氟得克利、賓得克利、甲基鋅乃浦、銅快得寧、鋅錳克絕、福賽快得寧、鋅錳毆殺斯及鋅錳曼普胺,生物製劑為枯草桿菌。於田間藥劑防治試驗中得知,施用25.9%得克利水基乳劑時發病率最低(31.75±3.9%)、其次為62.5%賽普護汰寧水分散性粒劑(42±4.7%)、325g/L亞托待克利水懸劑(44.75±6.7%)及40%克熱淨可溼性粉劑(48.5±9.8%)。 本研究亦測試非農藥防治對抑制紅龍果莖潰瘍病菌株之效果,包括溫度處理、UV-C60W ( UV-C 253.7nm )照射、抗病品種篩選及中藥煎汁液處理等。測試結果顯示,以65℃處理病原孢子(102 spores mL-1)30分鐘,70℃處理病原孢子(103 spores mL-1)20分鐘或以75℃處理(103 spores mL-1)病原孢子10分鐘,皆可達到百分之百抑制發芽。於UV-C60W照射,距離在24cm,連續照射30分鐘效果最佳,培養2天後菌落直徑為24.1±0.6mm;而莖潰瘍病病菌(N. dimidiatum)孢子測試結果顯示,在35mm距離,連續照射103 spores mL-1、105 spores mL-1等倍數平板,達10分鐘、30分鐘及60分鐘,皆可完全抑制孢子發芽。不同品系對病原菌感受測試,證實以無傷口接種幼苗後,大紅(Dahong)x白肉(Baicou)之雜交組合的罹病度最低為30%。 以車前子煎汁液處理對紅龍果莖潰瘍病菌孢子發芽之影響,稀釋10倍對莖潰瘍病菌孢子完全抑制發芽,對照孢子發芽率達到91.5%。白花蛇舌草(H. diffusa)煎汁液分別稀釋10-10,000倍等,對孢子抑制率為89.2-98.6%。黃芩煎汁液(S. Radix)分別稀釋10-10,000倍,其孢子抑制率達到50.3-66.5%。另測試58種中藥煎汁液對紅龍果莖潰瘍病菌生長抑制效果得知,車前子(Plantago asiatica)、白花蛇舌草(Hedyotis diffusa)及黃芩(Scutellariae radix)等3種中藥於培養第3天後,具有抑制紅龍果莖潰瘍病菌菌絲生長效果,而培養4天後車前子仍具明顯抑制效果。2013年以車前子與白花蛇舌草等煎汁液稀釋20倍後,進行田間防治莖潰瘍病試驗,結果顯示處理後,紅龍果果實之罹病度分別為71.9%與75.5%:而嫩莖罹病度,則分別為31.3%與43.8%。2014年以車前子煎汁液稀釋20倍持續進行莖潰瘍病防治試驗,結果得知,果實罹病度為54.2%,效果最佳,與對照處理間(96.9%)有顯著差異。同樣又以車前子煎汁液稀釋20倍處理嫩莖之防治效果最佳(罹病度23.8%),與對照處理間(93.8%)有顯著差異。證實車前子煎汁液具有防治紅肉紅龍果果實及嫩莖莖潰瘍病之潛力。 調查紅龍果採後貯藏期間的病害,顯示可引起果腐病之病原有Bipolaris cactivora、Fusarium sp.、F. oxysporum、F. dimerum、Aspergillus sp.、Alternaria alternata、A. carthami、Dothideomycetes sp.、Diaporthe endophytica及Cladosporium sp.等10種。將白肉紅龍果果實以車前子煎汁液稀釋20倍處理後21天,於10℃、15℃、20℃、25℃及30℃等5個溫度下調查防治效果,結果以10℃貯藏下防治效果最佳,於第19天開始發病,對照組則在第11天即發病;而紅肉紅龍果方面,處理14天後,於10℃貯藏下,較對照組可延遲7天發病。上述結果證實,經車前子煎汁液處理及配合低溫貯藏,可有效降低兩種紅龍果果實罹病腐爛,增加櫥架壽命。"
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