| 摘要： 本研究由檬果罹病果實上分得55株菌株，經鑑定爲Botryosphaeria dothidea, B. ribis, Pestalotiopsis sp., Phomopsis sp., Colletotrichum acutatum, C. gloeosporioides，其中6株以形態與核酸序列鑑定爲檬果蒂腐菌Lasiodiplodia theobromae Griffon & Maubl.。由L. theohromae核醣體DNA的ITS區域設計種專一性引子Lth1，與廣效性引子ITS4配對，以最適煉合溫度58℃增幅得到一約420bp的產物，上述其他菌種不會形成產物。爲提升偵測靈敏度，建立半巢式PCR：第一段以ITS5/ITS4廣效性引子對增幅，第二段續以Lth1/ITS4增幅，可使偵測靈敏度達125 fg L. theobromae全量DNA。2004至2005年間，將半巢式PCR偵測技術應用於田間愛文檬果枝條帶菌調查與預採果買檢測。結果發現，三月至五月，病原菌由舊枝侵入當年度新枝，進入果授，舊枝中棲息的蒂腐菌爲重要的果實採收後蒂腐病的感染源。當年度新枝基部偵測率可達45.5%，新舊校交接處(63.3%)與老枝頂端(72.7%)的偵測率最高，老枝15公分處仍能測得蒂腐菌。由屏東、台南和嘉義等檬果主要產區的七個果園，於採收前1-1.5個月收集預採果實，萃取果蒂及其周圍果皮組織DNA，再將預採果實浸潤生長素益收(ethylene)以催熟，調查罹病率。2004年，樣果果實蒂腐病罹病率在0%~82%，半巢式PCR偵測率則在6.3%~76%之間；2005年果質罹病率約爲20%~92.9%，半巢式PCR偵測率則約29.2%~81%。雖然各果園半巢式PCR偵測率與預採果實罹病率不需相符，但得病率超過10%的樣本，半巢式PCR偵測率皆超過10%。依據政府『貯藏期果實病害預測方法』，訂定凡經預測之果園，蒂腐病罹病果實率在10%以下，得選爲日本外銷果園。半巢式PCR偵測以其靈敏與快速的優點，適宜開發成監測與偵測的技術。 |
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